Techniques pour repiquage lignées cellulaires

June 21

Techniques pour repiquage lignées cellulaires


Les scientifiques maintiennent une grande variété de cellules en laboratoire à ajouter à notre compréhension de la façon dont les cellules se développent, se multiplient et meurent. Pour maintenir les cellules, les scientifiques se divisent périodiquement - sous-culture ou de scission - les dans un milieu de croissance frais.

Subculture

Les cellules sont cultivées en suspension dans un milieu de croissance ou fixés à des boîtes de pétri en plastique ou des flacons. Comme les cellules se développent, ils deviennent plus denses, utiliser les éléments nutritifs et d'excréter les déchets dans le milieu. Par conséquent, les cellules doivent être régulièrement divisés en petits nombres et donné un milieu frais - généralement à un nombre spécifique de cellules par boîte.

méthode

Comptez et diluer les cellules en suspension dans un milieu frais. Pour les cellules attachées, éliminer le milieu usé et laver délicatement les cellules avec un tampon de solution saline. Exposer les cellules à une solution d'enzyme ou de sel pour briser les connexions cellule-cellule et cellule-plat - trypsine est le plus couramment utilisé. Arrêter la réaction enzymatique avec l'ajout de sérum animal, le lieu cellulaire mélange dans un tube et de spin dans une centrifugeuse. Retirer liquide, resuspendre délicatement les cellules dans un milieu frais, compter et de les disperser à la densité requise.

Considérations

Subculture cellules dans un environnement stérile avec du matériel stérile, pour éviter toute contamination bactérienne ou fongique. La densité cellulaire, la quantité de temps dans la trypsine et la fréquence de la sous-culture sont en fonction du type de cellule. Utiliser un microscope pour surveiller régulièrement les cellules.


          

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